La PCR temps réel est un outil puissant et rapide pour la détection et la quantification (qPCR) spécifique de microorganismes dans les eaux.

Cette méthodologie, très utilisée dans la plupart des pays, fait déjà l’objet d’une norme ISO pour la recherche de Legionella spp & Legionella pneumophila dans les eaux potables, sanitaires et industrielles. Elle est basée sur l’amplification et la détection de séquences génomiques spécifiques. La quantification de l’ADN cible se fait par une sonde spécifique marquée par le fluorophore FAM. Pour chaque réaction d’amplification, un ADN synthétique permet de vérifier l’absence d’inhibition et le bon déroulement de l’amplification. Ce contrôle interne est quantifié grâce à une sonde couplée au fluorophore HEX. Les kits DNA AMPLI-FLASH contiennent tous les réactifs prêts à l’emploi (96 tests) pour effectuer cette analyse.

→ Les kits DNA AMPLI-FLASH s’associent au kit de purification DNA PURE-FLASH pour apporter une solution complète, robuste et fiable permettant la détection et la quantification des légionelles dans les eaux.

Domaines d’application

Les kits DNA AMPLI-FLASH permettent une détection et une quantification optimale des bactéries Legionella spp et/ou Legionella pneumophila. L’analyse s’effectue après l’extraction et la purification de l’ADN d’échantillons d’eau (kit DNA PURE-FLASH) ; qu’il s’agisse d’EAUX POTABLES (filière de traitement, réseau de distribution), d’EAUX SANITAIRES (réseau d’eau chaude, réseau d’eau froide, thermalisme, piscine, forage…) ou d’EAUX INDUSTRIELLES (installations de refroidissement, stations de lavage, arrosage…).

Principe du protocole

1. Préparation du Mix, association de la solution Master Mix avec la solution sondes/amorces.

2. Répartition du Mix, selon le protocole classique soit 15 μl par puits PCR.

3. Ajout des extraits ADN, 5 μl par puits PCR.

4. Lancement de l’amplification PCR associée au thermo-profil.

Les plus de la technologie
DNA AMPLI-FLASH

RAPIDE

obtention des résultats en moins de 2 heures

SIMPLE

manipulation de 2 réactifs + tableau de pipetage

PERFORMANT

validée selon NF T90-471 et ISO 12869, applicable pour de nombreuses matrices

EFFICACE

un seul thermo-profil pour les deux systèmes PCR (Legionella spp et pneumophila)

FLEXIBLE

testée sur de nombreux thermocyclers (Chromo IV et CFX96, Bio-Rad – MIC, Bio Molecular Systems – Prime pro 48, Techne)

LIMITE DE DÉTECTION

5 UG
par puits PCR (5µl)

LIMITE DE QUANTIFICATION

25 UG
par puits PCR (5µl)

1
THERMO-PROFIL
pour les deux cibles

Jusqu’à

25 000 UG
quantifiables dans un puits

Conditionnement pour 96 réactions

– 1 tube de Master Mix,
– 1 tube de sondes & amorces « Prim’n’Prob »,
– 1 tube de témoin négatif « Negative control »,
– 1 tube de témoin positif « Positive control »,
– 1 tube de solution calibrante à diluer « Standard solution »,
– 1 tube de tampon de dilution « Dilution buffer ».

Matériel nécessaire

– Pipettes P10, P100, P1000 et pointes adaptées,
– Microtubes de 1,5 et 2,0 ml,
– Plaques ou tubes PCR,
– Thermocycler,
– Vortex.

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